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制备色谱仪的相关介绍
点击次数:2184 更新时间:2022-06-30
高速逆流色谱是一种连续高效的液—液分配色谱分离技术, 它不用任何固态的支撑物或载体。 它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种**的单向性流体动力学平衡,当其中一相作为固定相,另一相作为流动相,在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。
由于不需要固体支撑体,物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现,因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等,不仅使样品能够全部回收,回收的样品更能反映其本来的特性,适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触,使得样品的制备量大大提高,是一种理想的制备分离手段。
它相对于传统的固—液柱色谱技术,具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。HSCCC 技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术,已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域, 在天然产物行业中已被认为是一种有效的分离技术;适合于中小分子类物质的分离纯化。
制备色谱仪比较常用的是制备薄层板色谱、制备离心薄层色谱、制备干柱薄层色谱三个类别。
1、 制备薄层板色谱
制备板:一般使用200X200mm的薄层色谱板,吸附剂厚度为0.5~1mm,一般不超过2m,平均1mm厚需要的硅胶量为15~20g。为了得到低成本、铺层均匀的高质量制备薄层板,建议使用上海科哲公司的TD-II型全自动制备薄层铺板机。
点样:制备薄层分离的样品量大,一般采用条带点样、不使用圆点点样;一般1mm厚的硅胶*大约100mg,样品浓度不宜太稀,应在2~10%为宜。为了得到均匀而规则的点样结果,建议使用上海科哲公司的SP-3型电动薄层条带点样器。同时展开剂的用量比较大,点样位置要比较高
展开:薄层色谱层析缸要充分饱和,如制备板数量较多,请选用上海科哲公司的制备薄层板架;
显色:一般使用紫外灯或碘蒸汽等非破坏方式显色,或在板边缘进行化学试剂显色;
回收:将检测到的样品连同硅胶一齐刮下,防入砂芯漏斗,使用适当溶剂将组分洗脱,将洗脱溶剂蒸干即可。一般希望洗脱溶剂沸点较低,不与组分发生反应。
制备薄层板色谱优点是使用方便、便宜、节省人力,缺点是分离时间较长。
2、 制备离心薄层色谱
与普通制备板有三个不同点:
首先:色谱板是圆的,是径向色谱,分离能力优于方板;
其次:洗脱液的流动不靠毛细现象,靠离心力,减少了分离时间与脱尾,分离效能很高;
后:洗脱液是连续流动的,可以非常容易的形成梯度,并且不需要刮下吸附层,这样可以使色谱板可以反复使用;
所以,制备离心薄层色谱的分离效能与分离速度要远高于制备薄层板色谱,建议采用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制备离心薄层色谱仪。
3、制备干柱薄层色谱
可以看作棒状的薄层色谱,优点是简单易行,快速经济、制备量大。缺点是必须使用可透紫外的管材,而且在收集样品时要割断管材,使费用略高。上海科哲公司提供专用的薄层色谱柱。本方法与真空系统联用,构成减压真空色谱,性能会得到进一步提升。