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高速逆流色谱仪常用的溶剂体系选择
点击次数:106 发布时间:2020-07-22
  1、分配系数测定法
  一个稳定的两相溶剂体系是否适合于目标物质的分离,通常要看物质在该溶剂体系中的分配系数是否在一个合适的范围内。分配系数K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶质在固定相中的浓度,CM指在流动相中的浓度,CU指溶质在上相中的浓度,CL指溶质在下相中的浓度。一般而言,对HSCCC合适的K值范围是0.5~2。当CS/CM≤0.5时,出峰时间太快,峰之间的分离度较差;当CS/CM≥1时,出峰时间太长且峰形变宽。而当0.5<CS/CM<2时,可以在合适的时间内,得到分离度较好的峰形。
  2、 薄层色谱法
  采用薄层色谱(TLC)法也可选择对HSCCC合适的两相溶剂体系。在硅胶板上作薄层色谱试验,用水饱和的有机层(即两相中的有机相)作展开剂。如果需要分离的组分的Rf>0.5(低级性溶质),这说明此种条件适用于这些组分混合物的分离,而且弱极性的有机相适用于作流动相。对于极性较大的溶质Rf<0.5,则极性较强的那一相可作流动相。
  3、PLC扫描法
  对于一个未知样品,可以通过HPLC扫描的方法,对样品的复杂程度及其组分的极性程度有一个初步的了解。具体来讲,可以将样品注入一根15cm长的C18HPLC柱,以乙腈和水为流动相,以1ml/min流速,从100%乙腈梯度洗脱1h,观察样品出峰的位置。如果绝大部分峰的保留时间都小于15min,也就意味着这些组分是由含量小于25%的乙腈流动相洗脱出来的,在高速逆流色谱仪中可以采用极性溶剂体系,如正丁醇-水等;如果峰的保留时间是在15~50min之间,意味着这些物质具有中等极性,在CCC中可以采用中等极性溶剂;如果绝大部分峰在50min后洗脱出来,也就是由大于80%的乙腈流动相洗脱出来的,那么在CCC分离中应该采用弱极性的容积体系。
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